Изучение механизмов стресс-протекторного действия бромантана и хлодантана

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Авторефератдиссертации по теме "Изучение механизмов стресс-протекторного действия бромантана и хлодантана"

На правах рукописи

ХАЛИМОВ АЗАТ РАШИДОВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ СТРЕСС - ПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ БРОМАНТАНА И ХЛОДАНТАНА

03.00.04 - биохимия 14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

УФА 1997

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете и Уфимском научно-исследовательском институте глазных болезней АН РБ.

Научные руководители:

заслуженный деятель науки РБ, доктор медицинских наук, профессор Х.М. Насыров, доктор биологических наук С.А. Сергеева Научный консультант:

заслуженный деятель науки РБ, член-корреспондент АН РБ, доктор медицинских наук, профессор Ф.Х. Камилов Официальные оппоненты: доктор биологических наук С.А. Башкатов, заслуженный деятель науки РБ, доктор медицинских наук, профессор Ф.С. Зарудий

Ведущая организация: Челябинская государственная медицинская академия

Защита диссертации состоится 1997г. в часов на засе-

дании диссертационного совета Д 084.35.01 при Башкирском государственно?, медицинском университете по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государствен ного медицинского университета.

Автореферат разослан 997г,

Ученый секретарь диссертационного совета,

член-корреспондент АН РБ,

доктор медицинских наук, профессор

Э.Г.Давлетов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Поиск и разработка лекарственных препаратов, повышающих функциональное состояние организма и работоспособность человека при воздействии экстремальных факторов, обусловленных профессиональной деятельностью и средой обитания, сохраняют свою актуальность. Своевременная адаптация к чрезвычайным ситуациям, а также профилактика возникающих в данных условиях заболеваний, относятся к числу важных задач современной медицины. В связи с этим усилия многих исследователей направлены на изучение вопросов фармакологической коррекции нарушений функционального состояния организма и работоспособности человека при воздействии неблагоприятных профессиональных факторов и условий окружающей среды (Козловская М.М., 1973; .Вальдман A.B. и соавт., 1979; Бобков Ю.Г. и соавт., 1984; Лосев A.C., 1987; Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988; Ефимова Л.П., 1990; Морозов И.С. и соавт., 1988,1992; Сергеева С.А., 1993).

В настоящее .время сохраняется необходимость пополнения арсенала, такого рода лекарственных препаратов более эффективными средствами.

В НИИ'фармакологии РАМН ведутся разработки препаратов с актопро-текторным и адаптогенным типом действия, обладающих широким спектром биологических эффектов, которые позволяют использовать их в качестве фармакологических средств защиты в чрезвычайных ситуациях. Среди их важное место занимают производные адамантана: бромантан - психостимулятор с ак-гопротекторной активностью, внедренный в медицинскую практику (Бобков Ю.Г. и соавт., 1983; Морозов И.С., 1984; Медведкова С.А., 1984; Сытина Л.И., 1990; Ефимова Л.П., 1990; Кундашев У.К., 1992; Сергеева С.А., 1993; Красных Л.М., 1995) и хлодантан - разрабатывающийся в качестве адаптогена экстренного типа действия (Морозов И.С. и соавт., 1990; Соломин М.Ю., 1992; Сергеева С.А., 1993; Красных Л.М., 1995).

Фармакология лекарственных препаратов - производных адамантана . интенсивно исследуется (Морозов И.С., 1984; Медведкова С.А., 1984; Ефимова Л.П., 1990; Сытина Л.И., 1990; Жирнов E.H., 1991; Кундашев У.К., 1992; Соломин М.Ю., 1992; Сергеева С.А., 1993; Красных Л.М., 1995). Однако механизмы реализации стресс-протекторного действия бромантана и хлодантана изучены недостаточно. Немногочисленные данные о влиянии производных адамантана ia процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) носят фрагментарный ка-зактер. Отсутствуют данные о модифицирующем влиянии бромантана и хлэ-таптана па гипоталамо-гипофизарно-кортикоадреналовую систему (ГГКАС) эрганизма, а также на уровень инсулина - одного из важных регуляторов ис-юльзования эндогенных энергетических ресурсов в ходе адаптации. Исследо-зание механизмов действия актопротекторов - производных адамантана в ус-

ловиях экспериментальных моделей экстремальных состояний необходимо для разработки оптимальной фармакотерапии нарушений функционального состояния организма и работоспособности человека в условиях воздействия чрезвычайных факторов среды обитания и деятельности.

Вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования.

Работа выполнялась в рамках НИР "Изыскание и изучение механизма действия фармакологических средств, повышающих операторскую работоспособность в экстремальных условиях" по планам Научного Совета по фармакологии и фармации при Президиуме РАМН (№ гос. регистрации 01.86.0004517); "Разработка средств и способов фармакологической коррекции адаптивных процессов в экстремальных условиях" по планам Научного Совета по фармакологии и фармации при Президиуме РАМН (№ гос. регистрации 01.87.0004979).

Цель и задачи исследования. Основной целью исследования явилось изучение влияния на гипоталамо-гипофизарно-кортикоадреналовую систему организма, уровень инсулина и процессы ПОЛ новых, отечественных стресс-протекторов - производных адамантана, обладающих защитными эффектами в экстремальных условиях, а также исследование корреляционных связей между фармакокинетикой и динамикой развития фармакологических эффектов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучение влияния бромантана и хлодантана на уровень кортизола в сыворотке крови крыс при однократном и курсовом введении.

2. Изучение влияния бромантана и хлодантана на уровень инсулина в сыворотке крови крыс при однократном и курсовом введении.

3. Проведение сравнительного изучения влияния бромантана и хлодантана на уровень кортизола в сыворотке крови крыс в условиях модели иммоби-лизационного стресса.

4. Изучение влияния бромантана и хлодантана на процессы перекисного окисления липидов.

5. Изучение влияния исследуемых препаратов на содержание триглице-ридов, холестерина, липопротеидов высокой (ЛПВП) и низкой плотности (ЛПНП) в сыворотке крови крыс в условиях модели иммобилизационного стресса.

6. Исследование корреляционных взаимосвязей между фармакокинетикой и динамикой развития фармакологических эффектов бромантана и хлодантана. ;

Научная новизна работы. Впервые проведено сравнительное исследование влияния бромантана и хлодантана на уровень кортизола в сыворотке крови крыс при однократном и курсовом введении в условиях модели иммобилизационного стресса. Установлено модифицирующее влияние бромантана и хлодантана на гипоталамо-гипофизарно-кортикоадреналовую систему, регуля-

ция которой является одним из важных механизмов стресс-протекторного действия препаратов.

Впервые проведена сравнительная оценка влияния бромантана и хло-дантана на уровень инсулина в сыворотке крови крыс при однократном и курсовом введении. В работе впервые изучено влияние препаратов на процессы ПОЛ, показано, что бромантан и хлодантан понижают уровень одного из конечных продуктов ПОЛ — малонового диальдегида (МДА) в условиях экспериментального химического стресса, вызванного четыреххлористым углеродом (ССЦ).

Впервые исследовано влияние бромантана и хлодантана на уровень холестерина, триглицеридов и липопротеидов в сыворотке крови крыс при однократном и курсовом введении в условиях иммобилизационного стресса.

С помощью методов интегральной фармакокинетики впервые исследованы корреляционные связи между кинетикой концентраций бромантана и хлодантана в мозге крыс и динамикой развития фармакологических эффектов препаратов, характеризующих взаимодействие различных звеньев гипоталамо-гипофизарно-кортикоадреналовой системы. 1

Научно-практическая значимость работы. Анализ результатов, полученных в хоДе настоящего исследования, позволяет утверждать/ что одним из ведущих механизмов реализации основных фармакологических эффектов ак-топротекторов - производных адамантана является регуляция функциональной активности ГГКАС и ингибирующее влияние препаратов на процессы пере-кисного окисления липидов и, следовательно, мембраностабилизирующие свойства. . . -

Результаты работы вошли в комплекс документов, представленных в Фармакологический Комитет Министерства здравоохранения России для получения разрешения на клинические испытания хлодантана в качестве адаптоге-на. .... . • ■ ...

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Регуляция функциональной активности ГГКАС является одним из основных механизмов реализации защитных эффектов бромантана и хлодантана в экстремальных условиях.

2. Бромантан и хлодантан оказывают ингибирующее влияние на процессы перекисного окисления липидов и проявляют мембраностабилизирующие свойства.

3. Использование методов интегральной фармакокинетики для анализа всей совокупности фармакокинетических и фармакодинамических данных создает основу для решения многих теоретических и прикладных проблем современной фармакологии на новом методологическом и количественно обоснованном уровне.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на I научной сессии Российской академии последипломного образования "Успехи теорети-

ческой и клинической медицины" (Москва, 1995 г.); III Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1996 г.); IV Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1997 г.).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 10 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на ^^страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, 5 глав результатов собственных исследований, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 15 рисунками. Библиографический указатель включает 174 отечественных и 85 иностранных публикаций.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования проведены на 350 белых беспородных крысах - самцах, массой 180-200 г., содержащихся на стандартной диете вивария.

Бромантан и хлодантан вводили перорально в одинаковой дозе 100 мг/кг однократно или ежедневно в течение 14 дней (курсовое введение).

Концентрации инсулина и кортизола в сыворотке крови крыс определяли радиоиммунным методом на установке Гамма-12 (КПО "Медаппаратура", Украина) с использованием моно-тестов (СП "Белорис", Беларусь).

Для исследования антирадикальной активности препаратов in vitro использовали липосомы из яичного желтка на фосфатном буфере. Хемилюми-нссценцию инициировали добавлением 1 мл 0,05М сульфата железа (II) (Фархутдинов P.P., Лиховских В.А., 1995). Измерения проводили на установке с охлаждаемым фотоэлектронным умножителем ФЭУ.

Для изучения влияния бромантана и хлодантана на процессы ПОЛ у крыс, использовалась классическая модель экспериментального СС14-гепатита (Владимиров Ю.А., Арчаков А.Н., 1972): СС14 вводили крысам подкожно в виде 50% масляного раствора 1 раз в сутки в течение 4 дней из расчета 0,4 мл на 100 г массы животного. Препараты вводили по следующим схемам:

1. Профилактическое действие. Ежедневное в течение 4-х суток перо-рапьное введение препаратов, затем ежедневное в течение 4-х суток введение раствора СС14.

2. Лечебное действие. Ежедневное в течение 4-х суток введение раствора СС14, затем ежедневное в течение 7 суток пероральное введение препаратов.

Хемилюминесценцию инициировали добавлением 0,05М раствора сульфата железа (II). Содержание малонового диальдегида в гомогенатах печени крыс определяли по методу Стальной И.Д. и Гаришвили Т.Г. (1977).

ского, полуавтоматического анализатора FP - 901 Labsystems (Финляндия), с помощью моно-тестов ("Cormy" Франция, Германия; "Labsystems" Финляндия). Содержание холестерина, триглицеридов, ЛПНП, ЛПВП определялось в одной пробе сыворотки крови.

Статистическую обработку и оценку достоверности различия, полученных в экспериментах результатов проводили с помощью t-критерия Стыодента с использованием пакета программ "Pharmacologic Calculation System" на компьютере IBM PC/AT 486 SX.

Корреляционные связи между кинетикой концентраций препаратов в мозге и динамикой развития фармакологических эффектов исследовались с помощью методов интегральной фармакокинетики совместно с доктором биологических наук Хоронько В.В. Для расчета параметров использовался следующий пакет программ:

REGPAR 1 - программа определения параметров линейных регрессионных зависимостей при построении комплексных расчетных параметров, необходимых при обработке исходной информации и согласовании её с параметрами других исследований.

Настоящая программа обеспечивает решение следующих задач:

- Оценка исходных и расчетных параметров между различными фарма-кодинамическими показателями.

- Ранжирование данных но возрастанию или убыванию.

- Получение средних значений параметров и их ошибок.

- Расчет коэффициентов линейной регрессии и корреляции, что позволяет проводить прогнозирование изменений в зависимости от изменения параметров, обычно недоступных для непосредственного исследования, а также построение графиков.

REGPAR 2 - программа определения параметров параболических регрессионных зависимостей при построении комплексных расчетных параметров, необходимых при обработке исходной информации и согласования её с параметрами других исследований.

Настоящая программа обеспечивает решение следующих задач:

- Оценка исходных и расчетных параметров между различными фарма-кодинамическими показателями.

- Ранжирование данных по возрастанию или убыванию.

- Получение средних значений параметров и их ошибок.

- Расчет коэффициентов параболической регрессии при проведении комплексных фармакокинетическо-фармакодинамических исследований.

При обработке данных использовали персональный компьютер IBM PC/XT. Программы реализованы в среде электронных таблиц Quattro Pro и Excel 5,0 (Шмидт M., 1994; Николь H., Альбрехт Р., 1996).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глюкокортикоиды и инсулин вместе с некоторыми другими гормонами были отнесены Г. Селье (1972) к категории адаптивных гормонов или "гормонов стресса". Глюкокортикоиды, являясь конечным звеном ГГКЛС, выступают как нсйрорегуляторы, изменяя уровни высвобождения в ЦНС медиаторов, участвующих в запуске и дальнейшем поддержании уровня функциональной активности этой системы (Хайдарлиу С.Х., 1984). Изменение уровня глюкокортикоидов в крови является маркером функционального состояния организма, особенно в экстремальных условиях.

Проведенные исследования позволили нам выявить помимо общих и некоторые специфические особенности влияния каждого из препаратов на уровень кортизола. Однократное профилактическое введение бромантана не изменяло содержание кортизола в условиях иммобилизационного стресса, однако курсовое введение препарата понижало концентрацию гормона в сыворотке крови крыс на 26,28% (таблица 1). Однократное профилактическое введение хлодантана более эффективно корригирует повышенный в результате иммобилизационного стресса уровень кортизола, понижая концентрацию гормона на 32,51% (Р<0,05). Эффекты бромантана и хлодантана при курсовом введении как в качественном, так и в количественном отношении аналогичны.

Таблица 1.

Содержание кортизола (М±т; нмоль/л) в сыворотке крови крыс после однократного и курсового перорального введения бромантана и хлодантана (доза 100 мг/кг) в условиях воздействия иммобилизационного стресса.

1 Иммобилизацион ! ный стресс (ИС) Однократное введение бромантана + ИС Курсовое введение бромантана + ИС Однократное введение хлодантана + ИС Курсовое введение хлодантана + ИС

1 52,15±7,06** 51,99±2,26 38,45±3,36 35,2±2,82* 38,52±3,88

1 КОНТРОЛЬ

1 интактные иммобилизационный стресс

1 13,77±2,98 52,15±7,06

Отличие от контроля (иммобилизационный стресс) достоверно * р<0,05; ** р<0,01

Модуляция ITKAC под влиянием бромантана и хлодаитана реализуется среди прочих эффектов (нейрохимических, нейрофизиологических) за счет понижения уровня глюкокортикоидов, в частности кортизола.

Результаты изучения влияния бромантана и хлодантана на уровень одного из основных "гормонов стресса" - инсулина выявили специфические особенности каждого из препаратов (таблица 2).

Таблица 2.

Содержание инсулина (М±ш; % к контролю) в сыворотке крови крыс после однократного и курсового перорального введения бромантана и хлода'н-тана в дозе 100 мг/кг.

24 часа 14 дней

Контроль 100

Бромантан 172,39±21,1* 119,03±7,64

Хлодантан 107,5±6,29 39,34±15,42**

Отличие от контроля достоверно * Р<0,05; ** Р<0,01

Через 24 ч после однократного введения бромантана уровень инсулина возрастал на 72,3% (Р<0,05). Хлодантан, через 24 ч после однократного введения, влияние на содержание инсулина практичеси не оказывал, а курсовое введение препарата сопровождалось понижением уровня гормона на 60,66% (Р<0,01). При курсовом введении бромантана концентрация инсулина в сыворотке крови крыс возрастала незначительно (19%).

С целью исследования взаимодействия различных звеньев гипоталамо-гипофизарно-кортикоадреналовой системы и изменения концентрации препаратов в ткани-мишени мозге нами разработан пакет программ КЕСРАЯ 1, Ш^РАК. 2 и проведен корреляционный анализ с использованием методов интегральной фармакокинетики (Хоронько В.В., 1994).

Проведение корреляционного анализа позволило выявить взаимосвязи между фармакокинетикой и фармакодинамикой (влияние на уровень физической работоспособности; изменение амплитуды доминирующего пика спектров мощности ЭЭГ разных структур мозга; влияние на кинетику экстраклеточного уровня дофамина и 3,4-диоксифенилуксусной, гомованилиновой, 5-оксииндолуксусной кислот в дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс (Сергеева С.А. и соавт., 1996); изменение уровня инсулина и кортизола в крови) бромантана (рис. 1-5), а также между фармакокинетикой (Хоронько В.В. и соавт., 1997) и динамикой изменения уровня инсулина и кортизола на фоне хлодантана (рис. 6).

2И-IC3-

ОТ КОНТРОЛЯ

'¿к Рис.

-Йт i ф

8 Т(час) 0 м

1СОО-(CD3 830630 WO 2CD-

C нг/ftlii')

6C01 500 400300 200" 100-

V. CT ксктсш

Т(час)' 7 8 РИС. В

ЛМШкВг/Гц)

.I.A. Влияние бромантана на длительность бега крыс в третбане (о % к контролю) пои поаторных нагруз>

B. Кинетическая кривая содержания- бромантана в мозге (I) и плазме крови (2) коыс после пероральш введения бромантана.

C. Влияние бромантана на амплитуду доминирующего пика (АДП) спектров мощности ЭЭГ по «Зупье коры левого (КЛ) и правого (КШ полушарий мозга, гчплоко.мпа (ГПК) и гипоталамуса (ГИГ), по оси абсцисс 1,2,3 — 8...24 - часы после введения бромантана.

D Экстраклеточное содержание ДА, ДОФУК, ГВК и 5-ОИУК в допзальном стриатуме свободноподвижньк крыс при действии бромантана. -о ДА, -----------ХДОФУК,-----АГВК,----• 5-ОИУК.

Р^ 0,05.

Рис. 2. А. Динамика содержания корта зола з сыворотке крови крыс после" однократного парольного введения бромантана (Д=100 мг/кг). Б. Днначика содержания инсулина в сыворотке крови крыс после однократного шроралъного введения бромантана (Д=Ю0 кг/кг).

В результате анализа выявлены корреляционные взаимосвязи высокой степени достоверности, описываемые как гиперболической зависимостью, так и линейной регрессией:

I. Бромантан

1. Кинетика высвобождения 5-ОИУК в дорзальном стриатуме - кинетика инсулина в крови: Еп=0,216.

2. Кинетика высвобождения 5-ОИУК в дорзальном стриатуме - кинетика кортизола в крови: Егг=0,372.

3. Кинетика высвобождения ГВК в дорзальном стриатуме - кинетика инсулина в крови: Егг=0,694.

4. Кинетика высвобождения ГВК в дорзальном стриатуме - кинетика кортизола в крови: Егг=1,613.

5. Кинетика высвобождения ДОФУК в дорзальном стриатуме - кинетика инсулина в крови: Егг-0,52.

6. Кинетика высвобождения ДОФУК в дорзальном стриатуме - кинетика кортизола в крови: Егг=0,676.

7. Кинетика высвобождения дофамина в дорзальном стриатуме -кинетика инсулина в крови: г=-0,98 (Р<0,001).

8. Кинетика высвобождения дофамина в дорзальном стриатуме -кинетика кортизола в крови: г=0,74 (Р<0,01).

9. АДП СМ ЭЭГ латерального гипоталамуса левого полушария мозга -кинетика инсулина в крови: Егг=1,60.

10. АДП СМ ЭЭГ латерального гипоталамуса левого полушария мозга -кинетика кортизола в крови: Егт=2,068.

11. АДП СМ ЭЭГ' дорзального гиппокампа - кинетика инсулина в крови: Егг=0,591.

12. АДП СМ ЭЭГ дорзального гиппокампа - кинетика кортизола в крови: Егг=1,66.

13. АДП СМ ЭЭГ сенсомоторной коры правого полушария мозга -кинетика инсулина в крови: Егг=0,935.

14. АДП СМ ЭЭГ сенсомоторной коры правого полушария мозга -кинетика кортизола в крови: Егг=1,65.

15. АДП СМ ЭЭГ сенсомоторной коры левого полушария мозга -кинетика инсулина в крови: Егг=1,044.

16. АДП СМ ЭЭГ сенсомоторной коры левого полушария мозга -кинетика кортизола в крови: Егг=1,65; г=0,78 (Р<0,01).

17. Уровень физической работоспособности - кинетика инсулина в крови: Егг—2,82.

18. Кинетика бромантана в мозге - кинетика инсулина в крови: Егт=3,315; г=-0,68 (Р<0,05).

аля cli ззг :ai

Инсулин

дортпзол

АДП СМ ОЕГ ГПК

линейная

ш ал зэг птг

нелинейная"

JStz 2-3^ Кгг 1-2%

Р< 0,01

tízz 0,5 - 1%

Рис. 3. Корреляционные зависимости шзду давашпсой развития нейрофизиологических эффектов и кинетикой инсулина и кортиэсяа в крови крыс после однократного поморального введения 0роман-тана в дозе 100 ыг/кг»

АДП СМ ЭЗГ КД - амплитуда доминирующего пика спектров мощности ЭЗГ сенсомоторноп коры левого полушария мозга АДП CIA ЗЗГ КП - амплитуда доминирующего пика спектров мощности ЗЭГ сенсомоторноп коры правого полушария глозга АДП СМ ЭЗГ ГПК- амплитуда доминирующего пика спектров мощности

ЗЭГ дорзачьного гипнокампа. АДП СМ ЭЗГ ГПТ- амплитуда доминирующего пика спектров мощности ЗЗГ латерального гипоталамуса левого полушария мозга»

Рис. 4. Корреляционные зависимости мевду экстраклеточным содерж; ни ем дофамина, 3,4-диоксифенилуксусной кислоты ЩОФУК), 5-оксиинд< уксусной кислоты (5-ОИУК), гомованилиновой кислоты (ГВК) в дорзел: ном стриатуме свободяоподвинкых крис и кинетикой инсулина и корти зола в крови крыс после однократного перорального введения бро-мантана в дозе 100 мг/кг.

Кортизол

Физическая работоспособность

линейная

нелинейная

ттттттттятштт Иж 3 - 4 %

ттштттшштшт Е^Ь 2 - 3 %; Р< 0,05

Рис. 5. Корреляционные зависимости меящу ^армакокинетикол бромантана в мозге, влиянием препарата на длительность бега крыс в третбане при повторных нагрузках (физическая работоспособность) и кинетикой инсулина и кортизода в крови крыс после однократного перораяыюго введения бромантана в дозе 100 глг/кг.

1С.', оль/л I*

С нг/г (мл)

3 5 6 7 Г~?Ц

4 (час)

1 с 3 4 5 6 7 е 24 43 72 " 'иас'

Рис. 6. А. Динамика содержания кортизола з сыворотке крови крыс посла однократного перорального введения хлодантана (Д=Ю0 :/,г/кг).

Б. Дкнат'.ка содержания инсулина в сыворотке крови крыс после однократного перорального введения хлодантана (Д=1СС мг/кг)

Б. Кг.кэтпческая кривая содер:;санпя хлодантана в мозге (I) : крови (2) крыс после однократного перорального введения хлодантана (Д=1С0 г/,г/кг).

II. Хлодантан

1. Кинетика кортизола в крови - кинетика инсулина в крови: г=-0,706 ;Р<0,05).

Результаты, полученные в ходе настоящего исследования позволяют ут-зерждать, что применение методов интегральной фармакокинетики, то есть комплексного подхода к анализу совокупности фармакокинетических и фарма-содинамических данных, создает основу для решения многих теоретических и трикладных проблем современной фармакологии на новом методологическом 1 количественно обоснованном уровне.

Бромантан и хлодантан - протекторы ССЦ-индуцированного [ерекисного окисления липидов и выраженпо корригируют процессы ;вободнорадикального окисления как в- сыворотке крови, так и в гомогенатах течени крыс. Установлено, что препараты достоверно понижают значения "фактически всех параметров хемилюминесценции в сыворотке крови и тшогенатах печени крыс в условиях экспериментального СС14-гепатита 'таблицы 3,4). Следует отметить, что применение препаратов эффективно как три профилактическом, так и при лечебном способе применения.

Таблица 3.

Влияние бромантана и хлодантана на параметры хемилюминесценции в выворотке крови крыс (М±т; усл.ед.) в условиях экспериментального СС14-^епатита.

Показатели хемилюминесценции ?

Спонтанное Амплитуда Период Амплитуда Светосумма

свечение быстрой вспышки Индукции медленной вспышки

2С14-гепатит 4,0±0,77 32,2±1,68 4,0±0,0 33,6±0,51 5,3±0,2

Бромантан-4дн затем 1,6±0,4* 21,0±1,41** 4,8±0,37 24,2±0,86ф* 3,8±0,12+*

СС14-4дн

СС14-4дн

затем 1,б-Ь0,4* 21,8±1,65** 4,4±0,24 28,2±1,36** 4,2±0,12**

бромантан-

7дн

СС14-4дн 2,2±0,2 21,4±2,04** 4,6±0,4 25,0±3,07* 3,8±0,4б*

затем

хлодантан-

7дн

Интактные 3,2±0,58 20,4±1,33* 4,4±0,24 28,0±1,26* 4,4±0,29*

Отличие от контроля (СС14-гепатит) достоверно *Р<0,05; ** Р<0,01

Курсовое введение, в течение 7 дней, препаратов в дозе 100 мг/кг ин-тактным крысам приводило к незначительному снижению уровня МДА в гомо-генатах печени в случае введения бромантана и на 8,1% (Р<0,05) в случае введения хлодантана (таблица 5). При профилактическом введении бромантана наблюдается понижение уровня МДА на 51,77% (Р<0,01) по сравнению с содержанием МДА у крыс с экспериментальным ССЦ-гепатитом. Введение бромантана и хлодантана после развития экспериментального ССЦ-гепатита также уменьшает содержание МДА на 6,32% и 14,42% (Р<0,05) соответственно. Хлодантан более интенсивно, чем бромантан понижает уровень МДА, как у интактных животных, так и при применении препаратов после развития экспериментального гепатита.

Таблица 4.

Влияние бромантана и хлодантана на параметры хемилюминесценции в гомогенатах печени крыс (М±т; усл.ед.) в условиях экспериментального СС14-гепатита.

Показатели хемилюминесценции

Спонтанное свечение Амплитуда быстрой вспышки Период Индукции Амплитуда медленной вспышки Светосумма

СС1,-гепатит 8,8±2,06 39,8±0,49 . 19,0±2,53 100,4±0,74 51,8±0,66

Бромантан -4дн затем СС14-4дн 2,6±0,24* 26,8±1,16** 14,0±0,55 78,8±2,63** 43,0±1,45**

СС14-4дн затем бромантан -7дн 3,8±0,58* 30,4±1,50** 14,4±0,51 74,2±4,39+* 40,0±2,14н<*

СС14-4дн затем хлодантан -7дн 3,2±0,8 33,4±3,09 12,2±0,97* 76,6±5,76** 42,0±2,74**

Интактные 2,2±0,2* 28,2±1,46** 10,2±0,37** 91,4±2,89* 49,2±0,58*

Отличие от контроля (СС14-геиатит) достоверно *Р<0,05; ** Р<0,01

При поиске синтетических антиоксидантов необходимо учитывать, что они должны обладать комплексом свойств: во-первых, иметь коэффициент распределения между полярной и неполярной фазами, соответствующей оптимальному взаимодействию с водорастворимыми и липофильными

вободными радикалами, во-вторых, эффективно взаимодействовать с адикалами без образования активных радикальных форм ингибитора, пособных пролонгировать ПОЛ, в третьих, обладать достаточно высокой одвижностью в бислое для обеспечения взаимодействия молекул птиоксидантов с центрами радикалообразования (Дюмаев K.M. и соавт., 1995).

Физико-химические свойства актопротекторов - производных адаманта и, соответственно, фармакокинетические параметры (в частности коэффи-иенты распределения ткань/кровь), по нашим данным, позволяют препаратам роявлять антиоксидантную активность как в гидрофильной фазе (печень, ровь), так и в липофильной фазе (мозг) (Мышкин В.А. и соавт., 1997). Более ысокая антиоксидантная активность хлодантана объясняется в частности его олее оптимальными физико-химическими свойствами по сравнению с бро-антаном. Через 1 час после однократного перорального введения хлодантан бнаруживается в крови, печени и мозге в более высоких концентрациях, чем романтан: концентрация хлодантана в крови - 594,69±40,64 нг/мл, концентра-ия бромантана в крови - 300,83±17,72 нг/мл; коэффициент распределения ечень/кровь для хлодантана - 11,59, для бромантана - 5,11; коэффициент аспределения мозг/кровь для хлодантана - 5,15, для бромантана - 3,99 Сергеева С.А., 1993; Красных Л.М., 1995).

Таблица 5.

Содержание малонового диальдегида (М±т; нм/мг белка) в гомогенате ечени крыс в условиях экспериментального СС14-гепатита при лечебном и рофилактическом введении препаратов в дозе 100 мг/кг.

Бромантан Хлодантан СС14- Бромантан СС14-4дн СС14-4дн

7дн 7дн гепатит -4дн затем затем

затем бромантан хлодантан

СС14-4дн -7дн -7дн

82,13±4,43 78,27±1,87 126,25±3,57 60,96±6,53 118,2±6,95 108,16±6,29

* ** *

К О Н Т РОЛ Ь

и н т а к т н ы е CC1 4 - гепатит

85,2±2,28 ■ 99,2±4,49 126,25±3,57

Отличие от контроля (ССЦ-гепатит) достоверно * р<0,05; ** р<0,01

Таким образом, анализ собственных экспериментальных исследований литературных данных позволяет заключить, что бромантан и хлодантан ин-ибируют процессы перекисного окисления липидсв, о чем свидетельствует

уменьшение параметров хемилюминесценции и конечного продукта ПОЛ -малонового диальдегида у интактных животных и более выраженно у живот ' ных с экспериментальным гепатитом, вызванным химическим стресс воздействием четыреххлористым углеродом.

Бромантан и хлодантан подобно другим перспективным соединения?, различных химических классов, оказывающим стресс-протекторные и антиок сидантные эффекты (Абдусаматов A.A., 1990; Дюмаев K.M. и соавт., 1995 Родькина Ю.Г:, 1997; Зорькина A.B. и соавт., 1997), проявляют корригирующш свойства на липидный спектр крови в условиях экспериментальных моделе£ экстремальных состояний. Бромантан и хлодантан способствовали пониженик уровня холестерина у интактных животных, особенно при курсовом введении -20,4% и 32,5% (Р<0,05), соответственно. Препараты не обладали выраженныл влиянием на содержание триглицеридов, ЛПНП и ЛПВП у интактных живот ных при всех режимах введения. Однако, следует отметить, что введение бро-мантана и хлодантана крысам в условиях иммобилизационного стресса положительно влияло на липидный спектр сыворотки крови и способствовало сохранению концентрации триглицеридов и ЛПВП на уровне интактных животных.

Анализ совокупности новых'сведений о механизмах защитного действия бромантана и хлодантана, полученных' в ходе настоящего исследования i результатов проведенных ранее работ по изучению спектра фармакологическо го действия препаратов, позволяет утверждать, что одним из ведущих меха низмов реализации основных фармакологических эффектов актопротекторов -производных адамантана является регуляция функциональной активное™ ГГКАС, ингибирующее влияние препаратов на процессы перекисного окисления липидов и, следовательно, мембраностабилизирутощие свойства.

Мембраноактивные антиоксиданты являются перспективными лекарственными средствами, поскольку они могут оказывать непосредственное влия ние на физико-химические свойства и функциональную активность биологиче ских мембран, воздействуя на рецепторную функцию и активность мембранос вязанных ферментов и проявлять широкий спектр биологического действш (Сергеева С.А., 1993; Дюмаев K.M. и соавт., 1995; Халимов А.Р. и соавт., 1996 Мышкин В.А. и соавт., 1997). Полученные в ходе настоящего исследованш сведения позволяют сформировать концепцию поиска новых соединений и: данного химического, класса - потенциальных лекарственных средств, оказывающих стресс-протекторное действие и установить ряд важных областей и> медико-биологического применения.

1. Модуляция гипоталамо-гипофизарно-кортикоадреналовой системы юд влиянием актопротекторов - производных адамантана - реализуется среди [рочих эффектов (нейрохимических, нейрофизиологических) за счет пониже-шя уровня эндогенных глюкокортикоидов, в частности кортизола.

2. Одним из механизмов стресс-протекторной активности бромантана в 1кстремальных условиях является способность препарата создавать повышений "инсулиновый фон" в сыворотке крови.

3. Бромантан и хлодантан являются протекторами СС14-шдуцированного перекисного окисления липидов. Выраженность антиокси-интных свойств модифицируется в зависимости от физико-химических :войств и, соответственно, фармакокинетических параметров адамантанов.

4. Центральным компонентом механизма защитного действия актопро-екторов - производных адамантана в экстремальных условиях среды обитания i деятельности, очевидно, является их способность модифицировать свойства типидных слоев клеточных мембран.

5. Бромантан и хлодантан являются перспективными соединениями для соррекции липидного дисбаланса крови, развивающегося в условиях экспериментальных моделей экстремальных состояний.

6. Установлены корреляционные зависимости высокой степени досто-зерности между кинетикой концентрации бромантана в мозге крыс и ди-тмикой развития фармакологических эффектов препаратов, характеризующих взаимодействие различных звеньев гипоталамо-гипофизарно-<ортикоадреналовой системы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Нейрогуморальные механизмы действия бромантана, обладающего защитными эффектами в экстремальных условиях // Успехи теоретической и клинической медицины: Материалы I научной сессии Российской медицинсхой академии последепломного образования. - М., 1995. - С.206-207. (Соавторы: Сергеева С.А., Насыров Х.М., Лосев A.C., Петросян Д.С.).

2. Исследование корреляционных взаимосвязей между фармакокинета-кой и динамикой развития фармакологических эффектов бромантана // Человек и лекарство: Тезисы докладов Ш Российского национального конгресса. - М.. 1996. - С.286. (Соавторы: Сергеева С.А., Хоронько В.В., Кудрин B.C. и др.).

3. Фармакодинамическое исследование бромантана // Там же. - С.294. (Соавторы: Насыров Х.М., Сергеева С. А., Фархутдинов P.P.).

4. К вопросу о стресс-протекторных свойствах бромантана и хлодантана // Фармация - здравоохранению: Материалы научной и учебно-методической конференции. - Уфа, 1996. - С.159. (Соавторы: Насыров Х.М., Сергеева С.А.).

5. Кинетика накопления' нейроиммуноМодуляторов бромантана и хлодантана в мозге крыс // Человек и лекарство: Тезисы докладов IV Российского национального конгресса. - М., 1997. - С.256. (Соавторы: Двалишвили Э.Г., Сергеева С.А., Красных JI.M.). "

6. Некоторые аспекты стресс-протекторного действия бромантана и хлодантана // Там же. - С.242. (Соавторы: Азнабаев М.Т., Насыров Х.М., Сергеева С.А;," Азнабаев P.A.).

' 7. Кл'иническоё применение нейротропного стимулятора бромантан // Там же. - С.242. (Соавторы: Азнабдев М.Т., Сергеева С.А„ Насыров, Х.М., Азнабаев P.A.). ,

8. Моделирование экологозависимых факторов при согласовании фар-макокинетики хлодантана и бромантана с изменениями уровней кортизола и инсулина // Там же. - С.183. (Соавторы: Хоронько В.В., Сергеева С.А., Красных Л.М.).

9. Влияние бромантана на уровень кортизола и инсулина в сыворотке крови крыс // Журнал Здравоохранение Башкортостана..- Уфа, 1997. - № 3. -С.7-10. (Соавторы: Насыров Х.М., Сергеева С.А.).

: 10. Перспективность применения бромантана в детской офтальмохирур-гии И. Вопросы офтальмологии: Материалы юбилейной научно-практической конференции. - Омск, 1997. - С.173. (Соавторы: Азнабаев М.Т., Азнабаев P.A., Насыров Х.М., Сергеева С.А.).